Procedimiento de tinción de Gram

Los médicos a menudo quieren determinar qué tipo de bacteria está presente en un paciente que tiene una infección. Por lo tanto, los profesionales deben realizar varias pruebas, y una de esas pruebas es procedimiento de tinción de Gram. Los expertos usan procedimiento de tinción gram como una de las técnicas para diferenciar 2 grupos de bacterias de acuerdo con sus características de la pared celular. Implica el uso de un tinte para ver que las bacterias retienen ya sea de color violeta o rojo en sus paredes celulares.

Cuando aplicar la tinción de Gram

procedimiento de tinción de Gram se utiliza para determinar si las bacterias son gram-positivos o gram-negativos. Este suele ser el primer paso en el proceso de identificación de bacterias que están presentes en los cultivos.
Este procedimiento es importante para dar una pista para el diagnóstico en personas con enfermedades infecciosas. También ayuda en la estimación del número total de las bacterias.
Los médicos pueden hacer una elección empírica del tipo de antibióticos que pueden prescribir a un paciente, en base a los resultados del procedimiento de tinción de Gram.
La elección de un medio de cultivo que se utilizará para la inoculación también puede hacerse empíricamente basándose en el informe de la tinción de Gram.

¿Cómo se realiza el procedimiento de tinción de Gram?

1. Preparar el portaobjetos de vidrio microscópico

Para asegurarse de que las diapositivas son la grasa / aceite libre-, es necesario lavarlos primero con agua y jabón luego limpie con alcohol diapositivas. Esto eliminará las huellas dactilares o la suciedad de ellos. Secar las diapositivas y ponerlos en toallas de laboratorio hasta que estén listos para ser utilizados.

2. Etiquetar las diapositivas

Dibuje un círculo bajo los portaobjetos usando un marcador diseñado para cristalería. Esto ayudará a designar qué área para preparar el frotis en el siguiente paso. También puede etiquetarlos con las iniciales del organismo en el borde de cada diapositiva. Tener cuidado de que las etiquetas no entran en contacto con el forstaining reagentsused.

3. Preparar el frotis

Para realizar una suspensión de bacterias en caldo, utilizar un bucle estéril enfriada para colocar una pequeña cantidad de caldo de cultivo en la diapositiva. Usando un movimiento circular extendió el caldo con el asa de inoculación hasta que es de alrededor de 1 cm de diámetro. No se debe extender en exceso para evitar la interrupción de la disposición celular. Un frotis adecuado permite el examen de células aisladas y su disposición celular característico.

Para hacer un cultivo en placa bacteriana, utilizar un bucle estéril enfriado y colocar una gota de solución salina o agua estéril en una diapositiva. Después de volver a esterilizar y enfriar el bucle, recoger una pequeña muestra de colonia bacteriana. agitar suavemente la colonia en la solución de agua o solución salina en la diapositiva y hacer una emulsión.

Para muestras de frotis, rodar un bastoncillo sobre un portaobjetos de vidrio limpio

Nota: Evitar la preparación de una gota gruesa, densa con muestra bacteriana exceso. Esto evitará que la luz pase a través y hacer que sea difícil ver la cellmorphology. Frotis por lo general requieren pequeñas cantidades de cultivo bacteriano solamente. Un frotis ideal se compone de una película delgada de color blanquecino después del proceso de fijación de calor.

Fijación 4. Caliente

Este paso mata a las bacterias en el frotis, y hace que se adhieren firmemente al portaobjetos, permitiendo que la muestra tome las manchas más fácilmente. El aire seco de su prueba. Mientras sostiene la diapositiva en un extremo (lado frotis hacia arriba), pasar la corredera a través de la llama de un mechero Bunsen, 2-3 veces. Evitar el exceso de calefacción para evitar la coagulación y la distorsión de las proteínas en la muestra. Ahora ya está listo para el procedimiento de tinción de Gram.

5. La tinción de Gram

Coloque el frotis fijado por calor en una bandeja de tinción.
Inundar su prueba suavemente con cristal violeta. Se deja reposar durante un minuto.
Incline ligeramente diapositiva y enjuagar suavemente con agua del grifo o agua destilada usando una botella de lavado.
Ahora inundar la mancha suavemente con yodo de Gram. Se deja reposar durante un minuto.
Incline ligeramente diapositiva y enjuagar suavemente con agua del grifo o agua destilada de una botella de lavado. Ahora su prueba aparecerá de color púrpura en la diapositiva.
El uso de acetona o alcohol etílico al 95%, decolorar el frotis. Incline ligeramente portaobjetos y aplique alcohol por gotas durante 5-10 segundos hasta que el líquido salga clara. No se exceda en decolorar.
Enjuagar inmediatamente con agua.
CONTRATINCIÓN inundando suavemente el frotis con safranina. Dejar reposar durante unos 45 segundos.
Incline ligeramente diapositiva y enjuagar suavemente con agua del grifo o agua destilada de una botella de lavado.
Séquelo con papel absorbente.
Examinar el frotis bajo un microscopio de luz (de inmersión en aceite).

Aquí está el vídeo que muestra cómo realizar el procedimiento de tinción de Gram en detalles: